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cck-8试剂盒、细胞增殖、细胞毒性检测试剂盒
产品编号:CK04
别名 cck-8试剂盒、细胞增殖、细胞毒性检测试剂盒 
英文名 Cell Counting Kit-8 
cck-8试剂盒、细胞增殖、细胞毒性检测试剂盒
中文名称:cck-8试剂盒、细胞增殖、细胞毒性检测试剂盒
中文别名:cck-8试剂盒、细胞增殖、细胞毒性检测试剂盒
英文名称:Cell Counting Kit-8
英文别名:Cell Counting Kit-8
cck-8试剂盒、细胞增殖、细胞毒性检测试剂盒 CCK-8试剂盒 Cell Counting Kit-8 CK04 检测原理: ◆ Cell Counting Kit简称CCK8,(CCK-8/WST-8)试剂盒,是一种基于WST-8(化学名:2-(2-甲氧基-4-硝***基)-3-(4-硝***基)-5-(2,4-二磺基***)-2H-四唑单钠盐)的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。 ◆ WST-8属于MTT的升级产品,工作原理为:在电子耦合试剂存在的情况下,可以被线粒体内的脱氢酶还原生成高度水溶性的橙黄色的甲臜产物(formazan)。颜色的深浅与细胞的增殖成正比,与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值,间接反映活细胞数量。 ◆ CCK法应用非常广泛,如药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。 CCK-8试剂盒 Cell Counting Kit-8 CK04 CCK方法的优势: ◆ 表1 CCK法与其他细胞增殖/毒性检测方法的优势比较 检测方法 MTT法 XTT法 WST-1法 CCK法 甲臜产物的水溶性 差(需加有机溶剂溶解再检测) 好 好 好 产品性状 粉末 2瓶溶液 溶液 1瓶溶液 使用方法 配成溶液后使用 现配现用 即开即用 即开即用 检测灵敏度 高 很高 很高 高 检测时间 较长 较短 较短 最短 检测波长 560-600nm 420-480nm 420-480nm 430-490nm 细胞毒性 高,细胞形态完全消失 很低,细胞形态不变 很低,细胞形态不变 很低,细胞形态不变 试剂稳定性 一般 较差 一般 很好 批量样品检测 可以 非常适合 非常适合 非常适合 便捷程度 一般 便捷 便捷 非常便捷 ◆ 酚红和血清对CCK法的检测不会造成干扰; ◆ 细胞毒性非常低,因此加入WST-8显色后,可以在不同时间反复用酶标仪读数从而找到最佳测定时间。 CCK法的操作步骤(更多内容请见说明书): 实验一:细胞活性检测 1、在96孔板中接种细胞悬液(100μL/孔)。将培养板放在培养箱中预培养(37℃,5% CO2)。 2、向每孔加入10 μL CCK溶液(注意不要在孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。 3、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。 4、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。 5、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。 实验二:细胞增殖-毒性检测 1、在96孔板中配置100μL的细胞悬液。将培养板在培养箱预培养24小时(37℃,5% CO2)。 2、向培养板加入10μL不同浓度的待测物质。 3、将培养板在培养箱孵育一段适当的时间(例如:6、12、24或48小时)。 4、向每孔加入10μL CCK溶液(注意不要再孔中生成气泡,它们会影响OD值的读数)。 5、将培养板在培养箱内孵育1-4小时。 6、用酶标仪测定在450nm处的吸光度。 7、若暂时不测定OD值,可以向每孔中加入10 μL 0.1M的HCL溶液或者1% w/v SDS溶液,并遮盖培养板避光保存在室温条件下。24小时内测定,吸光度不会发生变化。 注意:如果待测物质有氧化性或还原性的话,可在加CCK之前更换新鲜培养基(除去培养基,并用培养基洗涤细胞两次,然后加入新的培养基),去掉药物影响。当然药物影响比较小的情况下,可以不更换培养基,直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。 活力计算: 细胞活力*(%)=[A(加药)-A(空白)]/[A(0加药)-A(空白)] ×100 A(加药):具有细胞、CCK溶液和药物溶液的孔的吸光度 A(空白):具有培养基和CCK溶液而没有细胞的孔的吸光度 A(0加药):具有细胞、CCK溶液而没有药物溶液的孔的吸光度 *细胞活力:细胞增殖活力或细胞毒性活力 CCK-8试剂盒 Cell Counting Kit-8 CK04保存条件: 4℃避光保存一年有效,-20℃避光保存两年有效。 Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒)是由同仁化学研究所(Dojindo)开发的检测细胞增殖、细胞毒性的试剂盒,为MTT法的替代方法,试剂盒中采用自己开发的水溶性四唑盐-WST-8,在美国,欧洲等国家地区均持有专利,同仁化学研究所于2006年在中国获得了WST-8的注册商标。 CCK-8法与普通的MTT法相比,具有显著特点: ★灵敏度高,数据可靠,重现性好 ★操作简便,省时省力 ★水溶性,不需要换液,尤其适合于悬浮细胞 ★无需***性同位素和有机溶剂,对细胞毒性低 ★为1瓶溶液,毋需预制,即开即用 ★适合于高通量药物筛选 CCK-8用途:药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验 CCK-8试剂盒在国内知名科研院所、重点大学、三甲医院被广泛应用,国际认可度高,使用CCK-8发表的中外文献达600多篇,其中截止08年底SCI影响因子IF>10分的论文有37篇,最高IF26.5分 [Heterozygosity with respect to Zfp148 causes complete loss of fetal germ cells during mouse embryogenesis,Nature Genetics 33, 172 - 176 (01 Feb 2003)] CCK-8试剂与MTT等方法灵敏度比较 CCK-8试剂毒性:CCK-8和其他检测方法对比可以得出——CCK-8对细胞几乎无毒性,不伤害细胞,细胞可重复利用
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