产品类别：造血干细胞的分离
 
产品编号：LGS1068CB05
 
产品名称：人脐带血干细胞分离液KIT医用级
 
产品规格：200ml/KIT
 
产品价格：￥1800.00元

人脐带血干细胞分离液KIT说明书
 
【产品简介】
 
脐带血收集采用自然放血且从产房采集到细胞分离时长一般大于 2 小时，与外周血静脉采血且及时分离相比会影响分离效果，为此，灏洋优化配方以提高脐带血干细胞分离得率，请广大医疗及科研用户使用并提出宝贵意见。
 
【包装规格】
 

	名称	产品编号	规格
A	人脐带血干细胞分离液	LGS1068CB-200	200ml
B	红细胞沉降液（赠品）	HES-TBD550	200ml
C	清洗液（赠品）	2010X1118-100	200ml
D	说明书		1 份

 
【实验前准备】
 
适用仪器：最大离心力可达 1200g 的水平转子离心机
 
【检验方法】
 
全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。
 
方法一：
 

• 新鲜抗凝脐血与生理盐水及红细胞沉降液（6%羟乙基淀粉）按 1：1：1 的比例混合，自然沉降 30min（具体沉降时间应根据不同样本对应调整以保证沉降效果）。
• 沉降后取上层液体，300g 离心 15min，弃去 50%上清，以剩余 50%上清重悬沉淀，制成细胞悬液。

 

• 取 50mLPBMC 高效离心管，加入 15ml 分离液，200g 离心 1min 将分离液全部离心至隔片以下，倾去隔片上残留的分离液。

 

• 将细胞悬液加至隔片上，400-500g，离心 20-30min。

 

• 离心后取白色环状目的细胞层，清洗后重悬备用。

 
方法二：
 

• 新鲜抗凝脐血与红细胞沉降液（6%羟乙基淀粉）按 1：1 的比例混合。

 

• 取 50mLPBMC 高效离心管，加入 15ml 分离液，200g 离心 1min 将分离液全部离心至隔片以下，倾去隔片上残留的分离液。

 

• 将与沉降液混匀的样本加至隔片上，400-500g，离心 25min。

 

• 离心后取白色环状目的细胞层，清洗后重悬备用。

 
【注意事项】
 
1. 全过程样本、试剂及实验环境均需在 20±2℃的条件下进行。为获得最佳的实验结果，
 
最好在取血 2h 内进行实验，血液存放时间越长，细胞分离效果越差。血液放置超过 6h后分离效果更差甚至不能达到分离目的。
 

• 本实验最好不要使用高聚合材质（如聚苯乙烯）的塑料制品，应使用无静电、低静电离心管及未经碱处理过后的玻璃制品，因为静电作用将导致细胞贴壁、碱处理的玻璃表面会变成毛面，影响细胞分离效果。

 

• 如实验后细胞得率或活性过低，请联系技术支持以寻求帮助。

 
【储存条件及有效期】
 
常温保存，有效期 2 年。本品易感染细菌，需无菌条件操作。无菌条件下操作，启
 
封后置常温保存。如 4℃保存，本分离液易出现白色结晶，影响分离效果。
 
【参考值（参考范围）】
 
本实验干细胞提取率及纯度均大于 80%。
 
下表为成年人外周血中各种细胞的数量及比例，用户可适当进行参考。
 

	红细胞		白细胞		血小板
		（4.0-10.0）×109
	（4.0-5.5）×1012				（1.0-3.0）×1011
含量（个/L）		中性粒细胞	淋巴细胞	单核细胞
		50%-70%	20%-40%	3%-8%
【相关实验技术方案】

 

• 所获得干细胞的培养技术。

 

• 所获得干细胞的核酸提取技术。

 

• 所获得干细胞的鉴定方法A.流式细胞技术B.免疫组化技术C.原位杂交技术

 
D.PCR 技术
 
 
【可能存在的问题及解决方法】
 
1.  由于血液粘度、细胞密度等差异可能造成的问题及解决方案如下表所示：
 
 

	出现情况	出现原因	建议解决方案
	离心后目的细胞存在于血浆层或稀释液层	转速过小或离心时间过短	适当增减转速
	离心后目的细胞存在于分离液中	转速过大或离心时间过长
	离心后白环层弥散	细胞密度过大	调整细胞密度
	离心后白环层太浅或看不见	细胞密度过小

 

• 本分离液分离细胞的原理为密度梯度离心，其密度与温度、大气压等密切相关。不同地区客户可根据当地情况对离心条件进行适当调整。建议对离心条件进行调整时，恒定离心时间，对离心转速进行调整。

 

• 本分离液依照国际标准，全部使用药用级原料，性能指标与国产同类产品略有不同，可

 
能出现红细胞沉降不完全的情况，可以适当加大离心转速。
 
注：在对离心条件进行调整时，离心转速的加减以 50-100g 为基数，直至达到最佳分离效果，离心力最小不得小于 400g，最大不得大于 1200g。离心时间以 20-30min 为准。