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NCI-H520人肺鳞癌细胞传代、复苏注意要点

NCI-H520人肺鳞癌细胞
Human Lung Squamous Cell Carcinoma ,H520
货号:YJ-h238(STR鉴定)
价格: 1800.0
规格: 1*10 6              
细胞介绍
NCI-H520细胞是由Gazdar AF等在1982年建系而来,源于鳞状细胞肺癌组织;NCI-H520细胞p53 mRNA表达水平较正常肺组织低,但是没有大的结构DNA的异常。NCI-H520细胞角蛋白、波形蛋白阳性,神经丝三联蛋白阴性;NCI-H520细胞在软琼脂中可形成克隆。
细胞特性
1) 来源:人 肺癌组织
2) 形态:贴壁,上皮细胞样,多角形,紧密排列
3) 含量:>1x10 细胞数
4) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
5)用途:仅供科研使用。
对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。 
3. 轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。
下面T25瓶为例;
1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.
2. 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。
3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
 
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