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姬姆萨染色液(Giemsa Stain,1:9)

姬姆萨染色液(Giemsa Stain,1:9)
染色液(Giemsa Stain,1:9)
 
姬姆萨色素(又称吉姆萨色素)是由天青Ⅱ与伊红混合而成。Giemsa 染色原理和结果与瑞氏染色基本相同,姬姆萨染色液对胞浆着色力较强,能较好的显示胞浆的嗜碱性程度,特 别是对血液和骨髓细胞中的嗜天青、嗜酸性、嗜碱性颗粒,着色清晰,但是对胞核着色偏深,   核结构显色不佳,故姬姆萨染液常与瑞氏染液联合使用。Giemsa Stain 以进口的姬姆萨色素、甲醇为主要原料,含特有衬染剂,经研磨配制而成,能呈现出清晰的细胞染色效果,经常用于组织切片、血液和细胞涂片、细菌、染色体显带、原生动物寄生虫等染色。嗜酸性颗粒为碱性蛋白质,与酸性染料伊红结合,染粉红色,称为嗜酸性物质;   细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性,与碱性染料美蓝或天青结合,染紫蓝色,称为嗜碱性物 质;中性颗粒呈等电状态与伊红和美蓝均可结合,染淡紫色,称为中性物质。
 Giemsa Stain(1:9)由 10×储存液和磷酸盐缓冲液组成,1:9  混合成工作液后
使用;亦可以分开使用,即先用 Giemsa Stain 染色,再经磷酸盐缓冲液处理,亦可以得到
满意的染色效果。
 

成:

 
 
 
试剂(A): Giemsa Stain 储存液(10×)
100ml 10ml
500ml 50ml

RT 避 光
 
试剂(B): 磷酸盐缓冲液
100ml 500ml RT
 
 
 

材料:

1、 载玻片、显微镜
2、 蒸馏水
3、 甲醇
4、 0.1~0.5%乙酸
 
操作步骤(仅供参考)

(一)一法涂片染色

1、Giemsa 工作液的配制:
按试剂(A):试剂(B)=1:9 混合,即取 1 份 Giemsa Stain 储存液(10×)加入到 9 份的磷酸
盐缓冲液中充分混匀,即为 Giemsa 工作液,为即用型试剂,不易保存,即用即配。
 
 
 
 
2、常规方法制备血液涂片或骨髓涂片,待涂片自然干燥后,用甲醇固定 1~3min。
3、将血液涂片或骨髓涂片置于染色架上,滴加 Giemsa 工作液覆盖涂片,室温滴染 15~ 30min。
4、用自来水或蒸馏水缓慢从玻片一端冲洗。
5、干燥、镜检。

染色果:

 
嗜酸性颗粒嗜碱性颗粒中性颗粒

(二)两法涂片染色

1、Giemsa 工作液的配制:
粉红色紫蓝色淡紫色
 
按试剂(A):蒸馏水=1:4 混合,即取 1 份的 Giemsa Stain 储存液(10×)加入到 4 份的蒸馏水中充分混匀,即为 Giemsa 工作液。Giemsa 工作液为即用型试剂,不易保存,即用即配。
2、常规方法制备血液涂片或骨髓涂片,待涂片自然干燥后,用甲醇固定 1~3min。
3、将血液涂片或骨髓涂片置于染色架上,滴加适量 Giemsa 工作液覆盖涂片,室温滴染
10~15min。
4、加入等量磷酸盐缓冲液,轻轻晃动载玻片,室温静置 5~10min。
5、用自来水或蒸馏水缓慢从玻片一端冲洗。
6、干燥、镜检。

染色果:

 
嗜酸性颗粒嗜碱性颗粒中性颗粒

(三)组织切片染色

1、Giemsa 工作液的配制:
粉红色紫蓝色淡紫色
 
按试剂(A):试剂(B) =1:9 混合,即取 1 份 Giemsa Stain 储存液(10×)加入到 9 份磷酸盐缓冲液中充分混匀,即为 Giemsa 工作液。Giemsa 工作液为即用型试剂,不易保存,
即用即配。
2、新鲜组织立即置于 Regaud 固定液固定 2 天,期间应更换 1 次固定液。
3、3%重铬酸钾固定 1 天。
4、流水冲洗 16 个小时或过夜。
5、照常规脱水、包埋。
 
 
6、切片厚度约为 5μm,常规脱蜡至水。
7、蒸馏水清洗 2 次,每次 1min。
8、入含 Giemsa 工作液染缸,浸染 18~24h。
9、蒸馏水稍微清洗。
10、0.1~0.5%乙酸洗 1~2min。
11、自来水稍微冲洗。
12、用无水乙醇迅速脱水 3 次,每次 5~10s。
13、二甲苯透明,中性树脂封固。

染色果:

细胞核 蓝色至紫色
细胞质 淡蓝色
 
嗜铬细胞胞质结缔组织
黄绿色淡红色
 

注意事

1、血液涂片或骨髓涂片应厚薄均匀,以免影响染色效果。
2、涂片染色中 Giemsa 染色后,请勿先去除染液或直接对涂片用力冲洗。
3、如果染色过深或过浅,应调整染色时间或工作液浓度。
4、涂片染色和组织切片染色中,pH 值对染色有一定影响,载玻片应清洁、无酸碱污染, 以免影响染色效果。
5、染色液经稀释后液面应金属光泽则表示染液有染色作用,否则染色液可能失效。
6、组织切片染色中,染色后需用大量 0.1~0.5%乙酸急速冲洗,避免浮面沉淀物污染切片后难以洗脱。
7、0.5%乙酸分化常用于 Giemsa 组织切片染色,如有必要亦可用于细胞涂片,但其浓度应
适量下调。0.5%乙酸分化切片时,切片呈粉红色即可终止。
8、Giemsa 组织切片染色中,无水乙醇脱水要迅速,否则切片易褪色。
9、涂片染色和组织切片染色中,如需急速获得结果,可按 Giemsa  Stain   储存液(10×):磷酸盐缓冲液=1:1 配制 Giemsa 工作液,充分混匀,即为快速 Giemsa 染色工作液,将染色液滴加于细胞涂片或组织切片上,加热染色,20~30s 后重新加染色液,反复 5~10 次,
其余步骤同上。
10、染色液可重复使用,但不能多次重复,若有沉淀物应过滤后使用。
11、Regaud 固定液: 按 3%重铬酸钾:甲醛=4:1 配制,临用前混匀,1~2 天后失效。
有效期:24 个月有效。                  

姬姆萨染色液(Giemsa Stain,即用型)http://www.yanjinbio.com/article/135.html

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